医学检验所:江苏省太仓市太平北路115号 电话:400-110-8718 / 中国技术中心上海总公司:上海张江高科技园区 张衡路1670号 电话:021-60645888

实时定量PCR

实时定量PCR技术:是指在PCR反应体系中加入实时基团标记的探针,利用实时信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法,实时定量PCR技术是目前分子诊断领域具有代表性的主流应用技术,是临床分子诊断工具中常见、有用的诊断平台之一。

技术应用

重症联合免疫缺陷(SCID)是由于一系列基因突变引起的疾病,涉及到的基因有20多种,因其位于X染色体或常染色体上,遗传方式可分为性染色体或常染色体遗传方式。重症联合免疫缺陷(SCID)涉及T细胞产生和功能严重缺失,表现为偶尔或反复性感染、腹泻以及死亡。患有重症联合免疫缺陷(SCID)的孩子出生时没有症状,如果没有接受相关治疗,一般一岁以内死亡。重症联合免疫缺陷(SCID)估计发病率在1:30000-1:50000,但是在特定人群中由于基因突变,发病率会显著增高,比如腺苷脱氨酶(ADA)缺陷导致的SCID在索马里人群中发病率为1:5000[1-2]。

重症联合免疫缺陷(SCID)由于其基因突变的不同引起的临床症状略有不同,其具体表现形式如下:
由于T细胞的功能缺失从而导致新生儿偶尔或反复性的感染; SCID患儿出生是没有症状的,但是由于其T细胞的严重缺失,患儿在4-6个月母亲的抗体已经消失殆尽的时候有严重感染的高风险;如果没有接受及时的治疗,SCID患儿一般会在一年之内死亡。T 细胞发育过程中的剪切重组过程形成T细胞受体(TCR)对于识别外源抗体非常重要。为了形成大量数目的T细胞受体,剪切过程在胸腺中完成,VDJ剪接之后形成DNA片段会形成一个DNA副产物-T细胞受体剪切环(TREC- T cell receptor excision circles)。TREC很稳定且在分裂过程中不会再复制,因此,它们会逐步在细胞复制过程中被稀释掉。 TREC可以非常容易用PCR的方法扩增和定量,从而成为胸腺幼稚T细胞产生的标记物。重症联合免疫缺陷(SCID)孩子不能产生TREC,研究表明利用TREC检测重症联合免疫缺陷(SCID)具有100%的灵敏度,因此TREC检测成为比较经济准确的方法[3-7]。

技术优势

Perkinelmer苏州珀金埃尔默医学检验所提供的重症联合免疫缺陷(SCID)检测服务有以下几个特点:
Perkinelmer苏州珀金埃尔默医学检测所使用的检测试剂盒EnliteTM Neonatal TREC是FDA/CE-认证的,保证了重症联合免疫缺陷(SCID)检测的结果可靠性。
EnliteTM Neonatal TREC 试剂盒基于干血片的基础上,结合了荧光共振能量转移(TR-FRET)技术,提高检测的灵敏性。
Perkinelmer使用的方法只有四步:打孔-洗涤-扩增-测量,没有DNA提取过程,所有过程在同一孔里完成,所以避免了污染,保证结果可靠性。

参考文献

【1】Gurian E, Kinnamon D, Henry J, Waisbren S. Expanded newborn screening for biochemical disorders: the effect of a false-positive result. Pediatrics 2006; 117:1915–1921.
【2】Anotonia Kwan,MBBS and Jennifer M. Puck. History and current status of newborn screeing for severe combined immunodeficiency. Seminars in perinatology (2015)39:194-205.
【3】Stephan Borte,Ulrike von Dobelin and LennartHammarstrom. Guideline for newborn screening of primary immunodeficiency diseases. Curropin- Hematol(2013)20:48-54.
【4】Michael S. Watson,MarieY.Mann et al. Newborn screeing:Toward a uniform screening Panel and System-Executive summary. Pediatrics (2006 ) 17: 296-307.
【5】Sung-Yun Pai,BrentR.Logan and Linda M.Griggith et al. Transplantation outcomes for severe combined immunodeficiency,2000-2009. N Engl J Med (2014 ) 371(5):434-446.
【6】Jet van der Spek,Rolf H. H.Groenwold. Trec Based Newborn Screening for severe combined Immunodeficiency Disease:A systematic review. J clinimmunol(2015):35:416-430.
【7】Sung-Yun Pai, Morton J Cowan. Stem cell transplantation for primary immunodeficiency disease:the north Americanexperience. Curropin Allergy ClinImmunol (2014) 14:521-526.


2015 苏州珀金埃尔默医学检验所有限公司 版权所有
苏ICP备15022060号-1    苏公网安备 32058502010134号